樣品制備是任何實驗流程中的關鍵步驟。為了確保單細胞測序等下游應用的高質量結果，樣品必須純凈且不受檢索技術的影響。其中稀有或有限的細胞群通常更具有挑戰性，需要額外的富集步驟，以確保能分析到足夠的目標細胞以提供有意義的數據。雖然流式細胞分選（FACS?）已成為細胞分選方法的金標準，但在分選占比低的目標細胞時可能會很耗時。此外，當收集足夠的細胞用于下游應用時，過長的分選步驟可能導致大量細胞死亡。所以一個高效，快速和溫和的樣品制備儀器就至關重要，可以幫助我們跟隨細胞和分子生物學許多方面技術進步的腳步。

調節性T細胞（Tregs）是免疫系統中罕見且重要的細胞群。它們占總CD4+T細胞群的4-10%，僅占所有外周血單核細胞（PBMC）的1-5%。Tregs通過調節免疫系統中的其他細胞在免疫系統中發揮重要作用。具體而言，Tregs在預防過度免疫反應和自身免疫性疾病中起著至關重要的作用。臨床上，Tregs已被用于預防移植物排斥反應、自身免疫性疾病以及一些癌癥。由于Tregs是免疫系統的關鍵組成部分及其對各種疾病狀態的反應，因此在分子水平上了解Tregs的功能至關重要。研究Tregs的關鍵步驟是使用不損害細胞分選方法分選出足夠的細胞用于下游分析。由于目前的分選技術可能很耗時并且會對細胞產生壓力，因此開發一種溫和有效的方法來獲得高純度的目標細胞樣本用于下游分析至關重要。該應用說明演示了如何使用NanoCellect的WOLF細胞分選儀完成對Tregs的分選，并且很大程度的節省了時間并保持了細胞的高活性狀態。

使用密度梯度從血液中分離PBMC。然后使用人CD4+T細胞分離試劑盒（Akadeum）富集CD4+T細胞群。富集后，用WOLF細胞分選儀B進行Treg分選。下圖為WOLF 上的Tregs分選門。

由下方左圖結果可以看出，淋巴細胞群內的Tregs平均從1%富集至85-94%。并且在分選中通過結合散射和熒光活力染料鑒定活細胞來消除死細胞，富集前，平均91%的細胞群是活細胞，富集CD4+T細胞群后，活細胞百分比略有下降（80%），然而，在使用WOLF微流控柔性分選儀將死細胞和碎片排除后后，幾乎所有（98%）分選的細胞都是活的（下圖右）

在使用NanoCellect的WOLF微流控柔性單細胞分選儀進行Tregs分離之前，使用Akadeum的快速簡便的CD4+T細胞富集可以顯著減少獲得足夠數量的高純度活細胞所需的總時間，這些細胞可適用于更多的下游應用，如單細胞測序。雖然WOLF可以單獨獲得類似的純度，但組合技術在不犧牲純度的情況下將富集時間減少了15倍！此外，與傳統的高壓細胞分選機相比，該方法在不產生額外剪切應力的情況下提高了分選速度。

綜上所述，這個實驗展示了一個強大的工作流程，使用WOLF的組合方法可以更加快速地分選稀有的目標細胞并且不降低細胞活率，幫助我們優化整個實驗流程，提高工作效率！

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