T細胞幫助我們的身體對抗病毒、細菌和癌癥細胞,在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著關鍵作用。T細胞在免疫治療和傳染病中具有重要意義。分離的T細胞可用于多種下游應用,如T細胞培養(yǎng)、T細胞活化和擴增、基因工程/CAR-T和其他分子研究。具體而言,采用T細胞療法對癌癥B細胞淋巴瘤和轉移性黑色素瘤免疫療法的發(fā)展產(chǎn)生了影響。此外,抗原特異性T細胞的分離在疫苗的開發(fā)中起著重要作用。這些研究需要能夠有效和溫和地分選T細胞,以便進行下游基因改造或功能研究。WOLF細胞分選儀是一種溫和的微流體細胞分選機,能夠以最小的機械應力分選脆弱的細胞類型。在本文中,我們將展示W(wǎng)OLF溫和分選活T細胞以用于下游應用的能力。
對CD8和CD4兩路分選:從全血中分離PBMC,然后用CD8 FITC和CD4 PE抗體染色。使用BSC/FSC圈出細胞門后,使用自動補償減輕了PE和FITC的重疊,在流式圖上圈選出了CD8+和CD4+的細胞(下圖上),在WOLF上同時富集分選CD8+和CD4+細胞。分選后分析顯示CD8 T細胞和CD4 T細胞的純度分別為91%和96%(下圖下)。

分選后保持健康的細胞對于細胞培養(yǎng)和下一代測序等下游應用至關重要。傳統(tǒng)的細胞分選儀會導致大量細胞死亡,限制了分選后可以使用的下游應用程序的數(shù)量。為了確定分選后T細胞的存活率,我們使用CD3 AlexaFluor 488染色,然后用碘化丙啶(PI)染色,以確定細胞活力并分選活的CD3+細胞,下圖為分選時的所圈的活細胞門和CD3陽性門,分析顯示,55%的PBMC細胞是活的,CD3+細胞占比為21%。

在WOLF細胞分選機上分選后的細胞,再次用PI對分選的細胞進行染色,以評估其存活率。再次進行分析,得到了如下圖所示結果,細胞活率為92%,CD3+細胞被富集到了98%。這些結果表明,WOLF能夠成功地排除掉死細胞,同時幾乎不會導致細胞死亡。總之,本實驗證明了WOLF能夠分選脆弱的細胞類型并保持高存活率,T細胞在分選后的高活率,確保了下游實驗的高質量結果。

綜上所述,WOLF柔性單細胞分選儀具有較強的分析能力幫助我們進行死活細胞或熒光細胞的篩選,拓寬我們的應用場景。其微流控的低壓柔性分選還能夠極大的保留細胞活性,以便科學家進行下游的細胞培養(yǎng)、測序等對于細胞活性和完整性要求比較高的應用,助力科學家的實驗流程優(yōu)化,成為得力助手。

