樣品制備是任何實(shí)驗(yàn)流程中的關(guān)鍵步驟。為了確保單細(xì)胞測序等下游應(yīng)用的高質(zhì)量結(jié)果，樣品必須純凈且不受檢索技術(shù)的影響。其中稀有或有限的細(xì)胞群通常更具有挑戰(zhàn)性，需要額外的富集步驟，以確保能分析到足夠的目標(biāo)細(xì)胞以提供有意義的數(shù)據(jù)。雖然流式細(xì)胞分選（FACS?）已成為細(xì)胞分選方法的金標(biāo)準(zhǔn)，但在分選占比低的目標(biāo)細(xì)胞時(shí)可能會(huì)很耗時(shí)。此外，當(dāng)收集足夠的細(xì)胞用于下游應(yīng)用時(shí)，過長的分選步驟可能導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡。所以一個(gè)高效，快速和溫和的樣品制備儀器就至關(guān)重要，可以幫助我們跟隨細(xì)胞和分子生物學(xué)許多方面技術(shù)進(jìn)步的腳步。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）是免疫系統(tǒng)中罕見且重要的細(xì)胞群。它們占總CD4+T細(xì)胞群的4-10%，僅占所有外周血單核細(xì)胞（PBMC）的1-5%。Tregs通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中的其他細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。具體而言，Tregs在預(yù)防過度免疫反應(yīng)和自身免疫性疾病中起著至關(guān)重要的作用。臨床上，Tregs已被用于預(yù)防移植物排斥反應(yīng)、自身免疫性疾病以及一些癌癥。由于Tregs是免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分及其對各種疾病狀態(tài)的反應(yīng)，因此在分子水平上了解Tregs的功能至關(guān)重要。研究Tregs的關(guān)鍵步驟是使用不損害細(xì)胞分選方法分選出足夠的細(xì)胞用于下游分析。由于目前的分選技術(shù)可能很耗時(shí)并且會(huì)對細(xì)胞產(chǎn)生壓力，因此開發(fā)一種溫和有效的方法來獲得高純度的目標(biāo)細(xì)胞樣本用于下游分析至關(guān)重要。該應(yīng)用說明演示了如何使用NanoCellect的WOLF細(xì)胞分選儀完成對Tregs的分選，并且很大程度的節(jié)省了時(shí)間并保持了細(xì)胞的高活性狀態(tài)。

使用密度梯度從血液中分離PBMC。然后使用人CD4+T細(xì)胞分離試劑盒（Akadeum）富集CD4+T細(xì)胞群。富集后，用WOLF細(xì)胞分選儀B進(jìn)行Treg分選。下圖為WOLF 上的Tregs分選門。

由下方左圖結(jié)果可以看出，淋巴細(xì)胞群內(nèi)的Tregs平均從1%富集至85-94%。并且在分選中通過結(jié)合散射和熒光活力染料鑒定活細(xì)胞來消除死細(xì)胞，富集前，平均91%的細(xì)胞群是活細(xì)胞，富集CD4+T細(xì)胞群后，活細(xì)胞百分比略有下降（80%），然而，在使用WOLF微流控柔性分選儀將死細(xì)胞和碎片排除后后，幾乎所有（98%）分選的細(xì)胞都是活的（下圖右）

在使用NanoCellect的WOLF微流控柔性單細(xì)胞分選儀進(jìn)行Tregs分離之前，使用Akadeum的快速簡便的CD4+T細(xì)胞富集可以顯著減少獲得足夠數(shù)量的高純度活細(xì)胞所需的總時(shí)間，這些細(xì)胞可適用于更多的下游應(yīng)用，如單細(xì)胞測序。雖然WOLF可以單獨(dú)獲得類似的純度，但組合技術(shù)在不犧牲純度的情況下將富集時(shí)間減少了15倍！此外，與傳統(tǒng)的高壓細(xì)胞分選機(jī)相比，該方法在不產(chǎn)生額外剪切應(yīng)力的情況下提高了分選速度。

綜上所述，這個(gè)實(shí)驗(yàn)展示了一個(gè)強(qiáng)大的工作流程，使用WOLF的組合方法可以更加快速地分選稀有的目標(biāo)細(xì)胞并且不降低細(xì)胞活率，幫助我們優(yōu)化整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，提高工作效率！

同騰睿杰（上海）生物科技有限公司作為Nanocellect中國南區(qū)總代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的售前售后服務(wù)。

聯(lián)系電話：021-50826962

聯(lián)系郵箱：sales@ttbiotech.com