iPSC是非常脆弱敏感的細胞，傳統流式分選中的機械應力會通過激活與細胞應激或分化相關的基因掩蓋或改變scRNA-seq結果。因此，在分選細胞時盡量減少機械應力是很重要的。此外，在cDNA產生和文庫制備之前減少死細胞和碎片，可以提高cDNA文庫的質量。熒光激活細胞分選是用于富集特定細胞群同時避免死細胞和碎片的常用技術。然而，使用高壓噴嘴液滴分選的傳統細胞分選方法會對細胞產生機械剪切應力；誘導基因表達變化和/或RNA降解。
精益生產是一種以減少浪費和提高效率為核心的生產方式，通過優化生產流程、減少庫存、提高產品質量等措施，實現生產過程的節能、減排、提效。精益生產的應用可以減少生產成本的浪費，提高生產效率和產品質量，提高企業的競爭力。
智能制造是一種基于數字化技術和智能化設備的生產方式，通過采用先進的制造技術和設備，實現生產過程的自動化、智能化和數字化。智能制造的應用可以提高生產效率和產品質量，減少人工成本的浪費，提高企業的競爭力。
WOLF柔性單細胞分選儀是一種溫和的低壓（<2 psi）微流控細胞分選儀。使用低壓細胞分選儀可以降低細胞上的剪切應力，從而使細胞更健康、更完整、活率更高，分選后的RNA完整性更高。WOLF還使用可拋棄式分選芯片，使樣品和鞘液接觸的所有東西都是無菌的，一次性的，并且不受樣品間污染。為了證明這種溫和的無菌細胞分選儀如何10x基因組學工作流程中的有時，我們將未分選的iPSC樣品制備與在NanoCellect WOLF或BD FACSAria?II上分選的iPSC樣品進行了比較。
下圖為兩種儀器的圈門流程，圈門的基本邏輯相同，而由下圖可知兩種儀器所圈的目標細胞占比大致相同。
我們將有關樣品RNA和測序質量的幾個關鍵指標進行了對比。WOLF分選的樣本“Median UMI Counts per Cell”比未分選的樣本（4668）增加了近7倍（32239），比BD FACSAria II分選的樣本（14949）增加了2倍（下圖A）。對于“Median Genes per Cell”觀察到類似的結果，其中WOLF比未分選的細胞增加了3倍，而BD FACSAria II分選的樣品僅比未分選的細胞多2倍（下圖B）。這些結果表明，從樣品中去除碎片和死細胞后，文庫的復雜性更高。我們在所有三種情況下都發現了相似數量的“Total Genes Detected”（下圖C），這可能是由于采樣如此多細胞的上限效應。最后，“%Reads Mapped to Transcriptome”顯示了唯一映射到特定基因的讀數的百分比。低百分比可能表明存在無法明確定位的片段化RNA。我們的結果顯示，分選后，Aria（65.8%）和WOLF（68.8%）中能夠映射到參考轉錄組的reads百分比有所提高（下圖D）。
該實驗表明，在10x基因組學應用程序的上游使用細胞分選儀可以提高文庫的復雜性。盡管在WOLF和Aria分選的樣本中，文庫的復雜性都得到了改善，但顯然WOLF的改善更為顯著，可以幫助我們獲得更多的數據。此外，即使這些結果表明檢測到的基因數量相似，但仍有較高的能夠映射到參考轉錄組的reads的百分比。這表明分選的樣品中污染較少，數據的可信度更高。
總之，這些結果表明，WOLF是一個功能完備的柔性細胞分選儀，是10x基因組學研究中的強大助力。
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