牛抗體的一個顯著特點是超長的CDR H3區域,并且有能力進入結構復雜的抗原表位,這在任何其他物種中都沒有觀察到。因此,牛免疫球蛋白作為針對多種抗原的臨床治療和研究工具具有巨大的發展潛力。然而,與其他物種不同,在單細胞水平研究牛免疫球蛋白基因的技術尚未得到全面開發。Scripps研究所和應用生物醫學科學研究所的Smider小組利用NanoCellect的新型細胞分選技術,建立了一種在單細胞水平上擴增牛免疫球蛋白VH和VL基因的新方法。
他們采用WOLF細胞分選儀和N1單細胞分配器將單個B細胞分選到孔中,用于cDNA 生產和單細胞(sc) PCR擴增,然后進行巢式PCR。由于細胞完整性很高,約有53%的孔同時產生了重鏈和輕鏈的序列。
這是首個全面優化單個牛B細胞抗體基因擴增的方案。與傳統的FACS相比,使用WOLF細胞分選儀進行分選后,可檢測到OneStep RT-PCR產物的單細胞數量增加了近一倍(下圖B),對重鏈和輕鏈進行測序的單細胞數量增加了41%(下圖C)。因此,scPCR從分選的B細胞中擴增牛VH和VL鏈基因的最佳條件在很大程度上取決于所用細胞分選儀器的類型和PCR擴增條件的優化。這項新技術能從單個牛B細胞中產生表達重鏈和輕鏈對的單克隆抗體,有助于快速鑒定重組牛抗體。人們對牛抗體基因重組知之甚少,而這種方法將能在單細胞水平上評估牛的重鏈和輕鏈基因重組。
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