中性粒細胞在慢性炎癥中起著關(guān)鍵作用，并與急性感染的抗菌功能有關(guān)。循環(huán)中性粒細胞的半衰期估計在13-191小時之間，如果被激活，它們可能會更快地衰亡。傳統(tǒng)FACS（流式細胞分選）的剪切力和壓力對這些壽命短、敏感的細胞來說過于苛刻。因此，科學家們更傾向于使用磁珠和離心梯度來分離中性粒細胞。然而，這些方法缺乏選擇存活細胞或更具體的多個標記的能力。例如，常見的中性粒細胞標志物CD16和CD66b將包括一些低表達的脫靶細胞，如單核細胞。因此，CD14和另一種中性粒細胞陰性標志物（如CD49d）的互補陰性選擇是非常必要的。NanoCellect的WOLF細胞分選儀允許這種多參數(shù)檢測和分選，類似于傳統(tǒng)的FACS，不同的式，WOLF單細胞柔性分選系統(tǒng)的微流控分選機制使用的壓力要低得多（<2 psi），這讓我們可以更溫和的分選得到更健康活率更高的細胞。
在本文中，我們驗證了這款易于使用的WOLF單細胞柔性分選系統(tǒng)對高純度的中性粒細胞進行分選的能力。
全血細胞經(jīng)染色后分析，檢測中性粒細胞陰性標記物CD49d和CD14，以及中性粒細胞陽性標記物CD16和CD66b。通過SytoxGreen細胞活力染料排除死亡細胞后分選，活中性粒細胞純度從31.84%（下圖左）提升至97.21%（下圖右），增幅超過三倍。
分選后的細胞僅有1.40%的細胞保持FL1陽性（AF488/SytoxGreen），純度通過CD49d/CD14/SytoxGreen染色得到驗證，表明分選不僅減少了非中性粒細胞，且未導致死細胞顯著增加。通過散射特性進一步驗證純度：中性粒細胞門內(nèi)純度從35.49%（下圖左）提升至95.25%（下圖右）。
綜上所述，WOLF單細胞柔性分選系統(tǒng)能夠以非常低的壓力分選中性粒細胞，并且在標記的配合下可以做到高純度和高活率分選，足以證實使用WOLF單細胞柔性分選系統(tǒng)是一種高效的中性粒細胞分選方法。這些結(jié)果表明，這項新型微流控細胞分選技術(shù)可用于研究中性粒細胞的新興功能、作用機制以及基于細胞的新型治療方法。
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