T細(xì)胞幫助我們的身體對抗病毒、細(xì)菌和癌癥細(xì)胞，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。T細(xì)胞在免疫治療和傳染病中具有重要意義。分離的T細(xì)胞可用于多種下游應(yīng)用，如T細(xì)胞培養(yǎng)、T細(xì)胞活化和擴(kuò)增、基因工程/CAR-T和其他分子研究。具體而言，采用T細(xì)胞療法對癌癥B細(xì)胞淋巴瘤和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤免疫療法的發(fā)展產(chǎn)生了影響。此外，抗原特異性T細(xì)胞的分離在疫苗的開發(fā)中起著重要作用。這些研究需要能夠有效和溫和地分選T細(xì)胞，以便進(jìn)行下游基因改造或功能研究。WOLF細(xì)胞分選儀是一種溫和的微流體細(xì)胞分選機(jī)，能夠以最小的機(jī)械應(yīng)力分選脆弱的細(xì)胞類型。在本文中，我們將展示W(wǎng)OLF溫和分選活T細(xì)胞以用于下游應(yīng)用的能力。
對CD8和CD4兩路分選：從全血中分離PBMC，然后用CD8 FITC和CD4 PE抗體染色。使用BSC/FSC圈出細(xì)胞門后，使用自動補(bǔ)償減輕了PE和FITC的重疊，在流式圖上圈選出了CD8+和CD4+的細(xì)胞（下圖上），在WOLF上同時富集分選CD8+和CD4+細(xì)胞。分選后分析顯示CD8 T細(xì)胞和CD4 T細(xì)胞的純度分別為91%和96%（下圖下）。
分選后保持健康的細(xì)胞對于細(xì)胞培養(yǎng)和下一代測序等下游應(yīng)用至關(guān)重要。傳統(tǒng)的細(xì)胞分選儀會導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡，限制了分選后可以使用的下游應(yīng)用程序的數(shù)量。為了確定分選后T細(xì)胞的存活率，我們使用CD3 AlexaFluor 488染色，然后用碘化丙啶（PI）染色，以確定細(xì)胞活力并分選活的CD3+細(xì)胞，下圖為分選時的所圈的活細(xì)胞門和CD3陽性門，分析顯示，55%的PBMC細(xì)胞是活的，CD3+細(xì)胞占比為21%。
在WOLF細(xì)胞分選機(jī)上分選后的細(xì)胞，再次用PI對分選的細(xì)胞進(jìn)行染色，以評估其存活率。再次進(jìn)行分析，得到了如下圖所示結(jié)果，細(xì)胞活率為92%，CD3+細(xì)胞被富集到了98%。這些結(jié)果表明，WOLF能夠成功地排除掉死細(xì)胞，同時幾乎不會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。總之，本實(shí)驗(yàn)證明了WOLF能夠分選脆弱的細(xì)胞類型并保持高存活率，T細(xì)胞在分選后的高活率，確保了下游實(shí)驗(yàn)的高質(zhì)量結(jié)果。
綜上所述，WOLF柔性單細(xì)胞分選儀具有較強(qiáng)的分析能力幫助我們進(jìn)行死活細(xì)胞或熒光細(xì)胞的篩選，拓寬我們的應(yīng)用場景。其微流控的低壓柔性分選還能夠極大的保留細(xì)胞活性，以便科學(xué)家進(jìn)行下游的細(xì)胞培養(yǎng)、測序等對于細(xì)胞活性和完整性要求比較高的應(yīng)用，助力科學(xué)家的實(shí)驗(yàn)流程優(yōu)化，成為得力助手。
