圖1評估TPT3：NAM堿基對的逆轉錄的實驗流程示意圖。帶有非天然核苷酸rTPT3或rNAM的RNA對具有不同的逆轉錄酶進行逆轉錄。用不同的方法分析了逆轉錄的加工性（請參閱上圖，逆時針）：通過PAGE檢測全長與截短的cDNA比率，通過LC-MS和Sanger測序檢測LC-MS融合cDNA，使用switchSENSE^®技術及模擬SELEX循環的動力學測量，以探索UB保留周期數。

特別的，在本研究中（見圖2）利用switchSENSE^®技術及heliX+設備對逆轉錄過程進行實時監測，使得MMLV和SSIV RT與RNA模板的結合和活性的動力學得以表征。

本研究通過在switchSENSE^®芯片上構建檢測體系，實現了對UBP摻入的動態量化測量。因此switchSENSE^®是研究其他逆轉錄酶和聚合酶活性強有力的技術手段。

圖2 switchSENSE^®生物芯片上的MMLV和SS IV RT活性測定流程示意圖。（A）芯片測試示意圖。首先，配體通過雜交固定在單個鏈錨定（1）。隨后，將RT與芯片核酸結合（2），然后注射dNTPS或DNTPS + dNaM TP以啟動逆轉錄（3）。最后，芯片被再生（4）。（B）在存在或不存在不同模板的dNaM TP的情況下，每個MMLV和SS IV RT的相對振幅，包括其標準偏差（N≥3），這些偏差來自延伸幅度的熒光變化。將48-1XRTPT3、48-2XRTPT3和24-NT RNA的值標準化為48-NT未修飾的RNA。（C）在結合階段，MMLV的熒光變化信號。（D）在不同dNTP濃度下逆轉錄（伸長）期間熒光變化的增加。（E）在底物濃度上繪制觀察到的速率以獲得催化速率圖 Kcat。