各種應用都需要生成穩定的單克隆細胞系,包括開發治療性抗體等生物制劑,或創建用于疾病模型的CRISPR工程細胞等等。雖然對工程細胞系的需求增加,但單克隆細胞系的生產仍然受到當前單細胞分選技術的限制。
在這里,我們將傳統技術與微流控分選儀(WOLF G2細胞分選儀,NanoCellect公司)等新技術進行了對比,后者可以支持高達9個熒光通道的分析,并能夠將單細胞分選到96孔或384孔板中,并具有高存活率和高生長率。此外,WOLF G2非常關注單細胞的活性,比較成熟的細胞系(如CHO)和更敏感的脆弱細胞都可使用WOLF G2分選為單克隆,細胞收到的分選壓力很小,從而具有更高的活性和增殖能力。
使用WOLF G2可直接將細胞懸液中的目標細胞以每孔一個的形式分選到孔板中,并排除掉粘連細胞和細胞碎片等。經過下游拍照儀器的計數統計,由WOLF G2分選得到的96孔板單克隆率可達到90%以上,單克隆率遠遠高于傳統有限稀釋的方法,大大的節省了時間以及試劑耗材成本。
培養第14天時對孔板進行熒光成像,并計數是否存在細胞系。計數結果與第0天的熱圖計數結果進行比較,以確定單克隆性(來自單個接種細胞)。14天后,96孔板上含有單克隆的平均孔數為87.4 ± 3.3%,384孔板上的平均孔數為88.1 ± 3.7%。
下圖為FACSAria Fusion(右)和WOLF G2細胞分選儀(左)分析、分選和單細胞培養專有工程Jurkat細胞的結果,培養后通過流式細胞儀對單孔進行分析。與傳統流式分選儀器FACSAria Fusion相比,WOLF G2將單克隆生長率提高了250%以上。
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