當(dāng)前有多種技術(shù)可用于體外分子互作檢測(cè)，每種技術(shù)都存在特定的優(yōu)勢(shì)和不足之處，因此，對(duì)于特定的分子互作檢測(cè)，如何選擇更加合適的技術(shù)，是廣大科研人員面臨的一種挑戰(zhàn)。目前諸多方法中，歸納起來(lái)，可以分為微流控表面結(jié)合法（例如表面等離子共振技術(shù)（SPR)或switchSENSE技術(shù)）或溶液中檢測(cè)法（比如等溫滴定熱分析（ITC）或微尺度熱泳分析（MST））。溶液中檢測(cè)法在樣本制備方面存在優(yōu)勢(shì)，同時(shí)不需要分子固定步驟，操作上更加簡(jiǎn)便；而以分子固定為基礎(chǔ)的方法，對(duì)樣本的需求量較少，能夠提供底物分子與配體分子解離方面的信息。本文主要是針對(duì)switchSENCE技術(shù)的介紹及標(biāo)準(zhǔn)操作流程手冊(cè)（SOP）中關(guān)于核心耗材芯片操作部分介紹，目的是指導(dǎo)儀器操作者深入了解及更加熟練準(zhǔn)確的使用該技術(shù)。本文內(nèi)容涉及配體偶聯(lián)，芯片介紹及操作。通過(guò)對(duì)該過(guò)程的了解，可以幫助科研人員評(píng)估switchSENCE技術(shù)是否適用于當(dāng)前的應(yīng)用。switchSENSE技術(shù)優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在微流控芯片上，實(shí)現(xiàn)以DNA為基礎(chǔ)的可控的配體分布，允許同時(shí)固定兩種不同的配體分子，并可調(diào)節(jié)兩種配體分子的固定比例，實(shí)現(xiàn)研究項(xiàng)目的特定需求。該技術(shù)可實(shí)現(xiàn)多種參數(shù)的表征，比如結(jié)合動(dòng)力學(xué)，親和性，酶活性檢測(cè)以及蛋白構(gòu)象變化檢測(cè)。

背景介紹

本文關(guān)于switchSENSE技術(shù)的SOP，其內(nèi)容包括整體SOP的一部分，涉及配體-DNA分子偶聯(lián)原理，芯片處理和操作建議，switchSENSE技術(shù)測(cè)量的模式。switchSENSE技術(shù)的核心為固定在微流控芯片上的DNA納米桿（一段短的DNA核苷酸序列）。芯片上的電極可以驅(qū)動(dòng)該攜帶有負(fù)電荷的DNA納米桿（“switched”)，而通過(guò)交叉改變電壓，能夠使得DNA納米桿在電場(chǎng)中產(chǎn)生高頻率的擺動(dòng)。納米桿的運(yùn)動(dòng)軌跡可以通過(guò)電驅(qū)動(dòng)的時(shí)間相關(guān)的單光子計(jì)數(shù)器對(duì)DNA分子上連接的熒光探針信號(hào)檢測(cè)進(jìn)行實(shí)時(shí)的捕獲。記錄的熒光信號(hào)強(qiáng)度與DNA納米桿相對(duì)于芯片表面的位置相關(guān)，因?yàn)闊晒馓结樢坏┙咏酒慕饘俦砻妫捎诎l(fā)生能量轉(zhuǎn)移，熒光信號(hào)會(huì)發(fā)生淬滅。

偶聯(lián)在芯片上的DNA，可以通過(guò)與攜帶有配體的互補(bǔ)DNA鏈進(jìn)行雜交，從而實(shí)現(xiàn)芯片的功能化。待測(cè)配體-DNA的偶聯(lián)可通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)或芯片表面配體捕獲兩種方式實(shí)現(xiàn)。由于該芯片很容易進(jìn)行再生以及與配對(duì)鏈重新雜交，因此同一張芯片可以實(shí)現(xiàn)多種分子互作檢測(cè)的需求，這也是該技術(shù)可用于多種應(yīng)用的根本原因，比如蛋白-蛋白，蛋白-DNA/RNA互作，小分子結(jié)合篩選，親和性檢測(cè)，構(gòu)象檢測(cè)，核酸酶活性研究。

分子互作的結(jié)合動(dòng)力學(xué)可以在動(dòng)力模式或靜止模式下進(jìn)行。在動(dòng)力模式下，DNA納米桿可經(jīng)電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)產(chǎn)生擺動(dòng)，底物分子結(jié)合參數(shù)可經(jīng)DNA擺動(dòng)速率進(jìn)行測(cè)量（動(dòng)力應(yīng)答）。底物分子一旦與配體結(jié)合，DNA納米桿的動(dòng)力摩擦系數(shù)增加，其運(yùn)動(dòng)速率隨之降低（請(qǐng)見(jiàn)Fig. 1）。在擺動(dòng)速率上的變化，可用于評(píng)估動(dòng)力學(xué)變化及親和性參數(shù)（Kon，Koff，Kd)以及蛋白大小（Dh）或配體和復(fù)合物構(gòu)象變化。總的來(lái)說(shuō)，動(dòng)力模式可以提供關(guān)于分子結(jié)合動(dòng)力學(xué)，蛋白直徑，構(gòu)象改變，熱溶及熱力學(xué)變化，蛋白多聚等；在靜止模式下，DNA在穩(wěn)定的電場(chǎng)中，可保持直立狀態(tài)，底物結(jié)合狀態(tài)可通過(guò)熒光距離接近感應(yīng)（FPS）的特性進(jìn)行檢測(cè)。熒光染料分子附近發(fā)生的結(jié)合事件將會(huì)改變?nèi)玖戏肿痈浇幕瘜W(xué)環(huán)境，導(dǎo)致熒光信號(hào)發(fā)生改變。靜止?fàn)顟B(tài)下信號(hào)的捕獲與底物分子的大小無(wú)關(guān)，例如小分子結(jié)合動(dòng)力學(xué)檢測(cè)。靜止模式下，可以獲取結(jié)合動(dòng)力學(xué)，熱溶和熱動(dòng)力學(xué)方面的信息，但是無(wú)法獲得蛋白直徑，構(gòu)象改變信息。此外，與動(dòng)力模式相比，靜止模式對(duì)于芯片的損耗較小，能夠延長(zhǎng)芯片的壽命。

另外一種檢測(cè)模式被稱為分子尺，基于熒光染料與芯片表面的相對(duì)位置而實(shí)現(xiàn)，多數(shù)應(yīng)用于核酸聚合酶活性檢測(cè)，以及聚集體/內(nèi)部交聯(lián)檢測(cè)。染料的逐步淬滅能夠指示染料的位置信息以及DNA納米桿的移動(dòng)方向。因此，當(dāng)聚合酶進(jìn)行DNA雙鏈合成時(shí)，由于熒光探針逐步遠(yuǎn)離芯片，能夠?qū)崟r(shí)的檢測(cè)到熒光信號(hào)的增強(qiáng)。

為了對(duì)switchSENSE技術(shù)測(cè)量的分子信息進(jìn)行分析和理解，對(duì)于Helix+設(shè)備的專業(yè)了解，生物芯片的質(zhì)量檢測(cè)以及實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化和設(shè)計(jì)，都非常重要。因此，對(duì)新的儀器使用者提供綜合性的培訓(xùn)，是十分必要的。

位于德國(guó)的Dynamic Biosensors公司提供以swithSENSE技術(shù)為基礎(chǔ)的儀器設(shè)備，為具備兩個(gè)LED光源的DRX2，可以激發(fā)紅色和綠色兩種熒光染料。該SOP適用于雙色DRX2設(shè)備，該設(shè)備被稱為heliX®，在2020年上市。

雖然配體分子必須與DNA分子提前進(jìn)行交聯(lián)，才能應(yīng)用于switchSENSE技術(shù)檢測(cè)，溶液中檢測(cè)的方法不存在特定的樣本制備流程。然而，對(duì)于其他方法，目的樣本需要極高的純度和穩(wěn)定性，為了得到可信的動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，樣本的存儲(chǔ)濃度需要精確的測(cè)量（例如經(jīng)分光光度法）。

heliX®系統(tǒng)與多種緩沖液兼容。推薦使用10mM的鹽溶液以及40mM的添加的單價(jià)鹽，PH值為中性，范圍可從5到10。推薦在緩沖液中添加表面活性劑（例如Tween）以及使用0.2um過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾。當(dāng)在動(dòng)力模式下進(jìn)行測(cè)量時(shí)，單價(jià)鹽離子濃度范圍應(yīng)從1到300mM（因?yàn)殡妶?chǎng)需要高的離子強(qiáng)度，促進(jìn)電驅(qū)動(dòng)的DNA納米桿移動(dòng)）。熒光測(cè)量可在鹽濃度達(dá)到3M下進(jìn)行以及在包含少量的各種細(xì)胞裂解液或血清的溶液中進(jìn)行（可加入EDTA將核酸酶失活）。

Fig. 1 switchSENCE測(cè)量的不同模式示意圖

配體-DNA交聯(lián)

該部分介紹了兩種將待測(cè)配體固定在芯片表面，使得芯片實(shí)現(xiàn)功能化的方法。配體分子首先通過(guò)共價(jià)連接，儀器純化或者芯片上捕獲的方法與互補(bǔ)配對(duì)的DNA納米桿鏈進(jìn)行交聯(lián)（請(qǐng)見(jiàn)Fig. 2）。通常情況，共價(jià)連接法優(yōu)于親和捕獲的方法，原因在于共價(jià)連接能夠提供更加穩(wěn)定的配體固定狀態(tài)，防止在解離過(guò)程中配體的脫落。但是親和捕獲，不需要復(fù)雜的樣本制備，僅需要少量的樣本即可完成捕獲過(guò)程。

Fig. 2 配體與配體鏈共價(jià)偶聯(lián)示意圖

共價(jià)偶聯(lián)

配體蛋白可與單鏈DNA寡核苷酸共價(jià)偶聯(lián)，該DNA寡核苷酸可與芯片表面的DNA納米桿進(jìn)行互補(bǔ)配對(duì)。共價(jià)偶聯(lián)需要Dynamic Biosensors GmbH提供商品化試劑盒，按照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行操作，提高偶聯(lián)的效率。大多數(shù)的交聯(lián)反應(yīng)是由氨基或硫醇基介導(dǎo)，普遍認(rèn)為氨基的偶聯(lián)效率高于硫醇基。如果反應(yīng)體系中的緩沖液包含伯胺（例如Tris為基礎(chǔ)的緩沖液）或硫醇（例如β巰基乙醇），在對(duì)交聯(lián)產(chǎn)物進(jìn)行下一步處理之前，需要進(jìn)行緩沖液替換。對(duì)于等電點(diǎn)小于6的蛋白，提供經(jīng)優(yōu)化的商品化試劑盒，其中包含可供選擇的交聯(lián)緩沖液。如果交聯(lián)過(guò)程需要添加還原劑，推薦使用TCEP（小于1mM）。

交聯(lián)需要的蛋白量推薦為100-200ug，在數(shù)輪的反應(yīng)后，產(chǎn)生攜帶有配體蛋白的互補(bǔ)核酸鏈。在交聯(lián)過(guò)程完成后，通過(guò)AKTA或proFIRE純化系統(tǒng)，經(jīng)離子交換層析法去除游離的核酸或過(guò)量的蛋白分子。一次switchSENSE測(cè)量過(guò)程僅需40ul，250nM的配體-核酸交聯(lián)產(chǎn)物。Dynamic Biosensors GmbH為交聯(lián)純化流程提供了完整詳細(xì)的操作步驟。

總結(jié)說(shuō)來(lái)，互補(bǔ)配對(duì)的寡核苷酸鏈和含有交聯(lián)連接子的溶液進(jìn)行混合，反應(yīng)完成后，過(guò)量的連接子被除去，接著向反應(yīng)體系中加入待檢測(cè)的配體蛋白。交聯(lián)過(guò)程可在室溫下進(jìn)行1h，也可在4攝氏度的條件下過(guò)夜反應(yīng)。后續(xù)使用AKTA或proFIRE純化系統(tǒng)對(duì)偶聯(lián)產(chǎn)物進(jìn)行純化，即將交聯(lián)產(chǎn)物加入到純化儀器中，并由預(yù)先準(zhǔn)備的不同鹽離子濃度的溶液對(duì)純化柱中的產(chǎn)物進(jìn)行洗脫。收集管可根據(jù)各產(chǎn)物的特性及洗脫時(shí)間的差異收集產(chǎn)物，將目的產(chǎn)物與游離的DNA或蛋白區(qū)分開(kāi)來(lái)。該過(guò)程同時(shí)包含對(duì)配體溶液進(jìn)行質(zhì)量控制的流程。在目的產(chǎn)物被收集管收集后，緩沖液替換成40mM的NaCl溶液，交聯(lián)產(chǎn)物的濃度由物質(zhì)在260nm的吸光值和DNA的消光系數(shù)4,90,000 L mol ?1 cm ?1（48個(gè)核苷酸系列）比值共同決定。產(chǎn)物可分裝后保存在-80攝氏度。

親和捕獲

對(duì)于芯片表面捕獲法，互補(bǔ)配對(duì)鏈可先經(jīng)修飾反應(yīng)，加上接頭。Dynamic Biosensors GmbH 公司提供一系列的捕獲方法，比如Tris-NTA, streptavidin, Protein A, Protein G, anti-GFP, anti-GST, biotin, digoxigenin以及 strep-tactin。無(wú)需樣本制備，修飾的DNA鏈經(jīng)互補(bǔ)配對(duì)與芯片雜交，然后通過(guò)接頭捕獲待檢測(cè)的蛋白分子。

switchSENSE生物芯片

heliX®適配芯片具有一個(gè)堅(jiān)固耐用的單玻璃微流控通道，能夠兼容高流速和腐蝕性化學(xué)物質(zhì)。該通道包含兩個(gè)測(cè)量點(diǎn)，每個(gè)測(cè)量點(diǎn)都能檢測(cè)紅色和綠色熒光信號(hào)，從而能夠?qū)崟r(shí)參考兩個(gè)信號(hào)或同時(shí)多路復(fù)用多達(dá)四個(gè)信號(hào)。該芯片還配備了一個(gè)射頻識(shí)別標(biāo)簽，便于輕松追蹤，記錄其狀態(tài)和使用歷史。請(qǐng)見(jiàn)Fig. 3.

Fig. 3  heliX®適配芯片示意圖

以下是對(duì)芯片的結(jié)構(gòu)介紹：

1. 錨定鏈為48個(gè)寡核苷酸序列，以3'端錨定在芯片表面；

2. 適配體鏈可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行定制，其范圍從標(biāo)準(zhǔn)的 96 個(gè)核苷酸序列或任何類型的 DNA 和/或 RNA 序列，到復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，例如用于研究大型分子復(fù)合物構(gòu)象變化的 DNA 折紙結(jié)構(gòu)或用于研究雙特異性分析物的超分子 DNA Y 結(jié)構(gòu)。適配體鏈的下半部分與芯片表面的錨定鏈互補(bǔ)——用于檢測(cè)點(diǎn)的適配體鏈1和用于檢測(cè)點(diǎn)2的適配體鏈2，從而實(shí)現(xiàn)芯片的功能化。在適配體鏈的3'端連接的熒光染料，從多種化學(xué)性質(zhì)各異的染料中選擇，能夠?qū)崿F(xiàn)信號(hào)檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)的紅色和綠色染料（Ra 和 Ga）經(jīng)過(guò)優(yōu)化，適用于 switchSENSE® 測(cè)量，并且與大多數(shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置兼容，而另外四種染料（Rb、Rc、Gb 和 Gc）可用于根據(jù)不同的化學(xué)性質(zhì)優(yōu)化信號(hào)檢測(cè)；

3. 配體鏈?zhǔn)且环N可替換的48個(gè)核苷酸的鏈，它既可以攜帶感興趣的配體，也可以在實(shí)時(shí)實(shí)驗(yàn)中作為不含配體的對(duì)照。感興趣的分子可以通過(guò)上述介紹的共價(jià)偶聯(lián)或標(biāo)簽捕獲法實(shí)現(xiàn)。芯片結(jié)構(gòu)請(qǐng)參考Fig. 4

Fig. 4 芯片檢測(cè)點(diǎn)整體結(jié)構(gòu)示意圖

switchSENSE生物芯片的測(cè)試和操作流程

在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，必須運(yùn)行 heliX® 適配器芯片測(cè)試，以評(píng)估芯片的質(zhì)量和是否適合實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行芯片測(cè)試，以評(píng)估其狀況并確保正確儲(chǔ)存（以保持DNA雙鏈形式且不附著配體）。為獲得一致且可靠的結(jié)果，應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)化條件下進(jìn)行芯片測(cè)試：在 25°C 的維護(hù)緩沖液（TE40）中，測(cè)試和備用溶液中含預(yù)先雜交的適配鏈1和2以及無(wú)配體鏈。

芯片測(cè)試的工作流程

芯片測(cè)試的工作流程由四個(gè)連續(xù)的步驟組成——（1）再生，（2）鈍化，（3）表面功能化以及（4）狀態(tài)測(cè)量。

1. 再生過(guò)程是通過(guò)使用再生溶液使雙鏈DNA納米桿變性來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這樣單鏈DNA錨定鏈仍附著在芯片電極表面；

2. 在鈍化步驟中，芯片表面會(huì)用含硫醇的鈍化溶液進(jìn)行處理。此過(guò)程在芯片表面形成一層自組裝單分子層，可防止非特異性結(jié)合并延長(zhǎng)芯片的使用壽命；

3. 表面功能化為適配體1-Ra-lfs 和適配體2-Ra-lfs 序列，分別與錨定1和錨定2雜交（請(qǐng)見(jiàn)Fig. 5)。

Fig. 5 芯片測(cè)試示意圖

然后，芯片會(huì)在維護(hù)緩沖液（TE40）中接受兩步狀態(tài)測(cè)量，包括電壓校準(zhǔn)和動(dòng)態(tài)響應(yīng)測(cè)量。

電壓校準(zhǔn)提供了關(guān)鍵信息，即有效驅(qū)動(dòng) DNA 納米杠桿所需的最敏感電壓切換范圍。這是通過(guò)施加不同的電壓并在每個(gè)步驟記錄熒光信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在足夠負(fù)的電壓下，帶負(fù)電荷的 DNA 納米杠桿完全從表面排斥。隨著電壓向更正值轉(zhuǎn)變，觀察到S型信號(hào)下降，這反映了 DNA 納米杠桿逐漸接近淬滅的金表面。此過(guò)程的關(guān)鍵讀數(shù)是DNA納米杠桿向下運(yùn)動(dòng)的拐點(diǎn)（見(jiàn)下圖IP），該拐點(diǎn)用于選擇后續(xù)動(dòng)態(tài)響應(yīng)測(cè)量的最佳電壓范圍。在對(duì)功能適配器芯片進(jìn)行測(cè)試時(shí)，軟件會(huì)在兩個(gè)紅色通道（R1 和 R2）中識(shí)別拐點(diǎn)。拐點(diǎn)應(yīng)在 -50 mV 至 400 mV 的范圍內(nèi)。如果未檢測(cè)到拐點(diǎn)，軟件將直接從分析中提供故障排除選項(xiàng)以幫助解決問(wèn)題。

Fig. 6 芯片測(cè)試信號(hào)示意圖

接下來(lái)進(jìn)行動(dòng)態(tài)響應(yīng)測(cè)量，在此過(guò)程中，DNA 納米杠桿在維持緩沖液（TE40）中通過(guò)交替電壓進(jìn)行驅(qū)動(dòng)。比IP更正的電壓會(huì)將 DNA 納米杠桿吸引向淬滅金表面，導(dǎo)致末端連接的熒光團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)降低。相反，比IP更負(fù)的電壓會(huì)將納米杠桿從表面推開(kāi)，從而產(chǎn)生較高的熒光信號(hào)。這些數(shù)據(jù)用于確定兩個(gè)電極的開(kāi)關(guān)幅度（相對(duì)幅度，以百分比表示）。功能正常的適配器芯片的相對(duì)幅度應(yīng)大于 40%（如表 1 所示）。

表1. 功能性 heliX® 適配器芯片的狀態(tài)參數(shù)：

在 heliOS軟件中設(shè)置芯片測(cè)試

1. 點(diǎn)擊如Fig. 7所示的圖標(biāo)打開(kāi)分析；

2. 選擇“新建”以創(chuàng)建新的檢測(cè)工作流程；

3. 重命名新的檢測(cè)工作流程（例如，CT ID XXX）并確認(rèn)更改；

提示輸入您的芯片 ID 作為檢測(cè)名稱，以便將您的芯片測(cè)試數(shù)據(jù)與相應(yīng)的芯片關(guān)聯(lián)起來(lái)；

4. 點(diǎn)擊軟件圖標(biāo)進(jìn)行保存；

5. 點(diǎn)擊（+）圖標(biāo)添加新的檢測(cè)方法；

 Fig. 7 軟件中建立芯片檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

6. 轉(zhuǎn)到“檢測(cè)”并選擇“芯片測(cè)試”；

7. 點(diǎn)擊“添加檢測(cè)”以確認(rèn)，此時(shí)默認(rèn)的芯片測(cè)試檢測(cè)方法將自動(dòng)打開(kāi)；

8. 通過(guò)打開(kāi)“芯片”下拉菜單選擇相應(yīng)的芯片位置（默認(rèn)位置 1）。如果芯片測(cè)試是系列實(shí)驗(yàn)的一部分，且需要不同條件（例如PE140、TE140 等），您還可以選擇不同的運(yùn)行緩沖液。但請(qǐng)注意，芯片測(cè)試始終在維護(hù)緩沖液（TE40）中進(jìn)行；

9. 點(diǎn)擊樣品托盤按鈕（燒瓶圖標(biāo)）以預(yù)覽樣品和緩沖液的位置；

10. 彈出樣品托盤，按照軟件提示放置小瓶，即再生溶液置于（1）位，測(cè)試和備用溶液置于（2）位，10毫升去離子水瓶（無(wú)蓋）置于（A）位，10 毫升鈍化溶液瓶（有蓋）置于（B）位；

11. 點(diǎn)擊“運(yùn)行”按鈕，分析啟動(dòng)向?qū)⒋蜷_(kāi)。按照提示順序操作，直到可以點(diǎn)擊“開(kāi)始分析”。

Fig. 8 芯片檢測(cè)中軟件自動(dòng)實(shí)驗(yàn)流程圖

heliOS 中的芯片測(cè)試評(píng)估

heliOS 提供了自動(dòng)的 heliX® 適配器芯片測(cè)試分析功能，旨在快速評(píng)估您的芯片質(zhì)量。要分析芯片測(cè)試的結(jié)果，只需在實(shí)驗(yàn)文件底部選擇“分析”，然后在自動(dòng)分析向?qū)е羞x擇 heliX 適配器芯片測(cè)試作為分析類型即可。

 Fig. 9 芯片檢測(cè)結(jié)果軟件分析界面

該分析包含四項(xiàng)自動(dòng)質(zhì)量檢查，用于評(píng)估芯片測(cè)試（請(qǐng)參見(jiàn)下面的示例，其中淺藍(lán)色軌跡代表檢測(cè)點(diǎn)1，深藍(lán)色軌跡代表檢測(cè)點(diǎn)2）：

1. 配體注入：這確保了配體注入能產(chǎn)生預(yù)期的熒光增強(qiáng)（上圖）。它還允許通過(guò)熒光振幅隨時(shí)間的變化（下圖）直觀評(píng)估來(lái)自測(cè)試溶液和備用溶液的互補(bǔ)鏈與固定錨點(diǎn)的雜交動(dòng)力學(xué)；

2. 拐點(diǎn)：這會(huì)驗(yàn)證在電壓校準(zhǔn)期間是否識(shí)別出兩個(gè)點(diǎn)的拐點(diǎn)；

3. 相對(duì)振幅：這決定了兩個(gè)點(diǎn)（僅在紅色通道中）的相對(duì)振幅是否超過(guò)功能正常的 heliX® 適配芯片所指定的閾值，如虛線所示；

4. 參數(shù)：這確保了可以從嵌入芯片中的射頻識(shí)別標(biāo)簽讀取關(guān)鍵信息（例如：芯片ID、再生次數(shù)和芯片有效期）。

Fig. 10 芯片測(cè)試結(jié)果示意圖

switchSENSE技術(shù)在三元復(fù)合物

及雙特異性抗體檢測(cè)中的獨(dú)特應(yīng)用

由于該技術(shù)基于操控性強(qiáng)的核酸鏈，并具備雙色檢測(cè)系統(tǒng)，因此可用于三元復(fù)合物互作檢測(cè)，比如PROTAC分子，雙特異性抗體操作，請(qǐng)見(jiàn)以下示意圖：

Fig. 11 三元復(fù)合物檢測(cè)示意圖

通過(guò)Fig. 11可知，可在芯片上設(shè)置“Y”型結(jié)構(gòu)，將兩種配體分別與“Y”型兩臂偶聯(lián)，將底物分子，比如PROTAC分子，雙特異性抗體等與兩配體進(jìn)行結(jié)合。檢測(cè)的原理為熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET），如果形成三元復(fù)合物，綠色熒光的能量將會(huì)轉(zhuǎn)移到紅色熒光，紅色熒光被激發(fā)后，經(jīng)檢測(cè)器檢測(cè)到信號(hào)。通過(guò)該種設(shè)計(jì)，可以在同一張芯片上，一次實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，同時(shí)檢測(cè)二元結(jié)合和三元結(jié)合，并可分析雙抗原之間對(duì)配體結(jié)合親和性的互相影響關(guān)系。

本文介紹了switchSENSE技術(shù)SOP中部分內(nèi)容，旨在幫助研究人員了解該技術(shù)原理，為實(shí)驗(yàn)需求選擇更加適合的技術(shù)。

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