全長單細胞 RNA 測序（scRNA-seq）在轉錄組學領域被視為金標準，它具有高靈敏度且能夠捕捉到轉錄本的復雜性。然而，傳統實驗方案或工作流程中所使用的文庫制備方法處理過程復雜且通量低。
現在有另外一種選擇，我們采用 plexWell? Rapid Single Cell 試劑盒（Rapid SC Kit）中的 plexWell? Rapid Single Cell Mini Kit 來構建一個微型化的 scRNA-seq 工作流程，以實現高通量生成高質量的測序數據。在這個過程中，試劑盒中互補 DNA（cDNA）生成部分通過 I.DOT進行了微型化處理，而用于測序的文庫制備則在單個管中以全體積進行操作。我們使用人類外周血單個核細胞（hPBMCs）來比較微型化 Rapid SC 工作流程和全體積 Rapid SC 工作流程與其他常見的全長工作流程（SMART-seq2、SMART-seq3 和 Takara SMART Seq Single Cell）的效果。通過改進文庫制備反應和使用 I.DOT微型化處理，微型化 Rapid SC 工作流程生成 cDNA 的時間減少了約 20%至 25%，與傳統方法相比，檢測到的基因數量比全體積 Rapid SC 工作流程多 25%，并且其性能也優于其他工作流程。
我們介紹了一種 plexWell 快速單細胞試劑盒（Rapid SC 試劑盒）工作流程（圖 1），其中 cDNA 生成被微型化并自動化，用于在一天內生產適合測序的全長轉錄組文庫。與 SMART-seq2 和其他傳統工作流程相比，這種微型化的 Rapid SC 工作流程的 cDNA 生成方法能節省試劑并縮短孵育時間，從而減少了文庫制備時間。Rapid SC 技術的獨特性，如自動歸一化，減少了需要進行質量控制（QC）測試的樣本數量，并且在下一代測序（NGS）文庫制備之前不需要標準歸一化。在 Rapid SC 工作流程的早期階段就對 cDNA 樣本進行了條形碼標記。NGS上機前使用 I.DOT 整合96個文庫也能使庫體積減少1/5?？焖?SC 試劑盒與自動化 I.DO（384 孔板或更高規格）的結合提高了處理效率，并顯著降低了成本，同時還能生成高質量的測序數據。
工作流程：
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單細胞分離
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cDNA 準備、純化、質量控制和定量
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NGS 文庫制備
非接觸式
I.DOT利用壓力噴射技術將源液無接觸分配到目標板，減少溶液從樣品板轉移到實驗板中間過程的交叉污染，節省槍頭等耗材，免去槍頭更換時間。
兼容多種溶液種類
可按需選擇多種液體類別進行分配，包括水、PCR緩沖液、引物、藥物、核酸、酶、蛋白溶液、DMSO（100%）、甘油（50%）、活細胞、3D微球等。
靈活性高
I.DOT可更換樣品板；8個加樣通道可獨立控制或協同使用；軟件智能計算最優分液流程；每次實驗可實現1-384種不同液體的分配移液；可從任意樣品孔向任意實驗孔分配；根據實驗需求選擇任意類型SBS實驗板，包括96，384和1536孔板，或一些客戶定制板，多種方式提升系統的靈活性。
速度快
向每孔分配10nl溶液，96孔板僅需10秒，384孔板僅需20秒。
死體積低
Pure Well樣品孔特殊存儲設計使孔內剩余體積<1μL。
液滴實時驗證
I.DOT的Drop Detection功能可實時監測分液過程中的每一滴液滴，以及液滴中的氣泡，這一簡單有力的工具確保了液滴的有效分配和實驗的優化。Drop Detection通過嵌置在樣品板下方的電路板形成96個微小的光路屏障，檢測不同位置樣品孔中噴射出的液滴通過光路屏障時光強度的變化。在液體分配結束后，Drop Detection可提供基于顏色或文本的監測數據。
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