萊茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）可能是研究最深入的微藻，可以作為理解許多生物過程的模型，包括光合作用、葉綠體生物學，晝夜節(jié)律系統(tǒng)、碳濃縮機制和環(huán)境應激反應。此外，由于其單倍體基因組和易于培養(yǎng)生長的特性，萊茵衣藻更多的被科學家用作開發(fā)遺傳工具的平臺和生產(chǎn)各種產(chǎn)品的基底。我們使用衣藻作為樣本證明了WOLF G2單細胞柔性分選系統(tǒng)的溫和分選能力。有了這臺儀器，我們可以將單個衣藻分選在96孔板中，表達GFP陽性目標細胞可以高度富集并能夠保持高活力狀態(tài)。

在每個實驗之前測定衣藻的生長曲線，以確定萊茵衣藻的快速生長區(qū)間。下圖為野生型和GFP表達型的生長曲線，數(shù)據(jù)表明，快速增長發(fā)生在第1天和第3天之間。因此，使用早期生長階段的培養(yǎng)物進行分選實驗。

分選前的衣藻樣本中表達GFP的比例為10%至50%，總共設置了5組實驗驗證WOLF G2對不同目標細胞比例樣本的富集效果。通過檢測葉綠素自發(fā)熒光（FL5；B706）和GFP（FL1；B525）來區(qū)分活的萊茵衣藻細胞，流式圈門情況如下所示。葉綠素自發(fā)熒光信號的強度是藻類細胞活力的直接反映，通常WOLF G2單細胞柔性分選系統(tǒng)上萊茵衣藻信號高于10⁴ decade表示活細胞，而低于10⁴ decade的低信號表示應激/死亡細胞。

在三周的時間內進行了五次獨立實驗，大量富集GFP陽性的萊茵衣藻。五個樣本是通過以不同比例將CC-4533（WT野生型）和CC-5416（GFP）細胞混合在一起制備得到。藍條代表分選前藻類陽性細胞占比，綠色條代表富集后的GFP陽性細胞占比。誤差線表示N=2個技術重復的標準偏差。

并且使用Novocyte流式細胞儀對GFP陽性萊茵衣藻進行富集后的陽性細胞占比的確認：A圖為富集前的衣藻以9:1的比例混合（WT CC-4533:GFP CC-5416），B圖為富集后的衣藻GFP細胞。

將GFP陽性細胞使用WOLF G2單細胞柔性分選系統(tǒng)和N1單細胞分配器進行單細胞分選，分選至96孔板。如下圖展示，經(jīng)過WOLF G2單細胞柔性分選系統(tǒng)分選后的單個衣藻細胞在培養(yǎng)三周后，依然有80%以上的細胞保持了高生長活力，并且長成了單克隆。長成的單克隆經(jīng)過鏡檢驗證了GFP熒光特性，下圖中圖A為分選的CC-5416的10x和40x明場圖像，圖B為10x FITC/GFP熒光圖像。比例尺代表10倍和40倍物鏡上的相對細胞大小。圖像是在倒置回波顯微鏡上拍攝的。GFP熒光暴露時間為150毫秒。

通過上述富集和單細胞分選實驗，以評估使用WOLF G2單細胞柔性分選系統(tǒng)富集活GFP陽性細胞的情況。證實WOLF G2單細胞柔性分選系統(tǒng)能夠溫和富集和單細胞分選活的GFP陽性萊茵衣藻細胞，并能夠在培養(yǎng)三周后顯示出高長成率。

高富集（>93%）效果和細胞高活力（>80%）的結合可以為科學家優(yōu)化各種應用的工作流程，包括各種生物產(chǎn)品的穩(wěn)定細胞系開發(fā)、生物燃料、物種/突變體分離和鑒定、組學研究、海洋監(jiān)測、健康、新藻類物種的發(fā)現(xiàn)/分離等。

WOLF G2單細胞柔性分選系統(tǒng)體積小、便攜、易于使用，非常適合野外作業(yè)。與傳統(tǒng)的噴氣式分選機相比，微流體系統(tǒng)提供了更溫和的分選環(huán)境，是保存藻類細胞活力至關重要的理想選擇。