圖1 （A）C.NEST培養系統包含四個獨立的腔室。（B）C.NEST培養環境控制。（C）C.NEST支持靜態培養和混合培養。（D）C.NEST軟件能同時控制4臺儀器。

在制藥工業，為了提高細胞培養的通量和效率，微型生物反應器一直在不斷發展。小規模的細胞培養方式在CLD早期階段和藥物篩選過程的優化方面都有很高的價值。C.NEST作為一款微型生物反應器不僅能夠實現混合培養，靜態培養的表現也不輸傳統的培養箱。

在這里，我們用C.NEST培養了不同規格的細胞孔板中的細胞，并與傳統培養箱中培養的細胞進行了比較。C.NEST靜態培養時，每個腔室可以放入兩塊384孔板或兩塊96孔板或一塊24孔板。

圖2 在C.NEST中用不同規格的細胞板靜態培養細胞。單細胞種在兩塊384孔板中，靜態培養10天。2×10⁵/mL CHO-S細胞種在兩塊96孔板和一塊24孔板中靜態培養。每個實驗都在傳統培養箱中設置對照實驗。

下圖顯示了384孔板中的細胞生長狀態，可以看到細胞生長速度與活率與傳統培養箱相比并沒有顯著性差異。

圖3 在 384 孔板中對 C.NEST 與標準培養箱的單細胞克隆進行比較。（A）通過一系列圖像對每個單細胞進行監測。（B）在顯微鏡下觀察克?。ū壤?= 1 毫米）。將融合度分為 3 個等級，并評估每個等級中克隆的數量和百分比。（C）每組克隆分布的熱圖。（D 和 E）展示了在第 10 天每個匯合度等級中活細胞和細胞活力的代表性數據。（F）由于邊緣效應，對外側孔的細胞活力進行了確認。數據使用單因素方差分析（one-way ANOVA）進行分析，并以均值±標準誤（mean ± SEM）表示。P 值的顯著性表示為：P≥0.05（無顯著差異，ns），P<0.05（*），P<0.01（**），P<0.001（***），P<0.0001（****）

24孔板和96孔板的實驗結果如下圖所示，細胞各方面表現與傳統培養箱相比也無顯著性差異。

圖4 對比C.NEST和培養箱培養的96孔板和24孔板中的細胞狀態。(A-C) 在培養第3天時，對96孔板培養的總細胞密度、活細胞密度和活細胞率進行分析。數據采用單因素方差分析進行分析。(D-F) 在培養第3天時，對24孔板培養的總細胞密度、活細胞密度和活細胞率進測量。數據采用配對雙尾t檢驗進行分析。所有數據均以平均值±標準誤表示，P值的顯著性以P≥0.05(ns)、P<0.05(*)、P<0.01(**)、P<0.001(***)、P<0.0001(****)表示。

哺乳動物細胞系，如CHO-S，通常用于生產生物制藥行業的治療性蛋白質。一般來說，治療性蛋白質是在高達2000 L的生物反應器中的細胞分泌，在大規模培養之前，需要經過一個復雜的過程來選擇和確認高產細胞系。搖瓶通常應用于工藝開發，但往往占用空間大。微孔板可以解決這些限制，在平行實驗中進行工藝開發。

在這篇文章中，C.NEST細胞培養系統顯示了不同細胞培養的能力 (圖3和圖4)。因此，在CLD過程中應用C.NEST是一個很好的選擇。我們已經證實，單細胞可以在C.NEST培養的384孔板中正常生長（圖3），96孔和24孔培養效果良好 (圖4)。表明克隆也可以擴大到96孔和24孔板，在同一個C.NEST室中進行靜態或混合培養。此外，多尺度微孔板可應用于多種領域，如384孔板可用于病毒細胞的篩選融合實驗，96孔板用于藥物發現中的細胞球形成，24孔板用于工藝開發中的培養基篩選。小型化的檢測方法可以減少大規模試驗的耗材成本，被認為是在醫學、生物技術等領域應用的一個趨勢。

同騰睿杰（上海）生物科技有限公司作為 Cytena C.NEST 新一代微型生物反應器中國代理商，為您提供優質的售前售后服務。

聯系電話：021-50826962

聯系郵箱：sales@ttbiotech.com